梯度PCR儀標(biāo)準(zhǔn)曲線總不成線性關(guān)系這是怎么回事？
發(fā)布時(shí)間：2014-03-21 閱讀：940次
隨著基因組高通量研究的需求的提高，各品牌都推出了多槽式高通量PCR儀，各有特長：MJ有一種一拖四，就是1個(gè)主機(jī)帶4個(gè)擴(kuò)增槽，每個(gè)槽可以控溫，一次可以作96x4個(gè)樣品的PCR，不過一旦出現(xiàn)問題4個(gè)都不能用了。這一技術(shù)保證了在梯度模式和普通模式之間可以進(jìn)行可靠的信息傳遞，不會因?yàn)闇囟忍匦圆煌鴮?dǎo)致產(chǎn)量和特異性的變化。
如果你做的等比稀釋，那一般都是加樣誤差導(dǎo)致的。你的移液器需要校正，不成線性，說明是曲線尾的濃度偏離較大。
1.梯度稀釋問題
主要引起原因：a加樣手法b試用低附著進(jìn)口耗材。
2.PCR管用高質(zhì)量PCR管，管身不能做標(biāo)記。
3.RealtimePCR儀器若為頂部激發(fā)檢測請使用透明光學(xué)管蓋。
4.PCR管不要放置在溫塊的邊緣位置。
5.做梯度前，把色譜柱用純的有機(jī)溶劑沖洗一下或是用新的色譜柱，防止柱內(nèi)殘留物引起基線的漂移。
6.試劑純度都是正規(guī)的色譜純試劑，如何純度不夠，在梯度時(shí)，也會出現(xiàn)基線的漂移。
7.控制好室溫或柱溫，防止有較在的溫度波動。
