唾液學檢測在非洲豬瘟定點清除技術中的應用
發布時間：2019-08-16 閱讀：229次
非洲豬瘟是一種緩慢傳播的接觸性感染性疾病，從窗口期感染到全身性感染（病毒血癥）需要具備一定的條件，較長的窗口期呈現也為凈化非洲豬瘟提供了防控時機。其中，唾液學的非洲豬瘟病毒檢測是實現早期凈化的重要方法之一，建議推廣使用。
非洲豬瘟疫情嚴重影響了我國的生豬生產和肉食供應，造成了養豬行業的大災難。縱其原因，雖然眾說紛紜，但檢測方法的失當是導致疫情泛濫的重要原因之一。
通用的非洲豬瘟血液學檢測方法是完全錯誤的，采血過程的污染程度是不可估量的，檢測操作過程是其危險的，同時血液學檢測結果也是嚴重滯后的。非洲豬瘟病毒的感染分為兩個重要階段：局部感染和全身感染。前者主要發生在口腔等咽喉部位（有時鼻腔也會被污染），后者則形成嚴重的病毒血癥。這兩個階段并不是缺一不可的，多數豬群往往僅 僅發生局部感染。若飼養管理方法不科學，則終形成全身感染，發生嚴重的非洲豬瘟臨床癥狀。通過加強管理，將感染限制在局部感染階段是實現安全生產的重要保證。
口腔內局部感染階段也是非洲豬瘟窗口期檢測的重要時機，是實現傳染病控制原則“早、快、嚴、小”的重要保證。探索非洲豬瘟唾液學檢測方法具有重要的科學指導意義和生產實踐意義。
1、唾液樣本的采集：獲得新鮮的唾液（saliva）樣本是準確診斷的前提條件之一。現行的鼻拭子（nasal swab）采樣、口腔拭子（oral swab）采樣以及肛門拭子（anal swab）采樣存在樣本陳舊、樣本容易干燥、漏檢率高等問題，已被逐漸淘汰。
2、唾液樣本中的病原半衰期：唾液中含有豐富的具備活性的酶。機體健康狀態不同，酶的含量也千差萬別，從而導致唾液中的病原體半衰期（half-life period）長短不一，對于非洲豬瘟病毒來說，長者 2～3 天，短者 1～2 小時不等。病原半衰期的存在是導致唾液學非洲豬瘟病毒漏檢率稍高的重要因素之一。
3、唾液樣本的核酸保護：采集唾液樣本之前加入適量的樣本保護劑（Sample Protesis®），可以延長病原半衰期并保持唾液活性，含有保護液的唾液樣本可以冷藏/冷凍運輸及保存。
4、唾液樣本的檢測要求：采集的唾液樣本要求清亮、透明并不得含有食物殘渣，故采樣之前的停食至關重要，原則上要求停食 12 小時以上。含有保護液的唾液中的核酸可以采用濃集法（concentration method）檢測，即離心唾液，試管底部取樣。
5、唾液樣本檢測對試劑盒的要求：由于口腔內的非洲豬瘟病毒感染往往處于初始階段，病原核酸含量相對較低（CT 值在25～30 之間，未加保護液的唾液樣本 CT 值往往在 32 以上），所以對非洲豬瘟病毒核酸檢測試劑盒的敏感性要求較高，要求盡量能夠實現單拷貝（single copy）檢測。
6) 陽性結果處置：對于唾液檢測中非洲豬瘟陽性結果（+），存 在兩種處置方案。一是嚴格剔除（“拔牙”，stamp out）陽性豬只，實現凈化生產。二是控制陽性豬群的移動，嘗試實施早期帶毒生產（局部感染而非病毒血癥），終實現凈化生產。
很多養豬科技工作者把帶毒生產簡單理解為血液中可以帶毒是非常危險的，也是禁止的。只有控制局部感染才有凈化豬群，消除病毒攜帶狀態的可能性。
非洲豬瘟疫情嚴重影響了我國的生豬生產和肉食供應，造成了養豬行業的大災難。縱其原因，雖然眾說紛紜，但檢測方法的失當是導致疫情泛濫的重要原因之一。
通用的非洲豬瘟血液學檢測方法是完全錯誤的，采血過程的污染程度是不可估量的，檢測操作過程是其危險的，同時血液學檢測結果也是嚴重滯后的。非洲豬瘟病毒的感染分為兩個重要階段：局部感染和全身感染。前者主要發生在口腔等咽喉部位（有時鼻腔也會被污染），后者則形成嚴重的病毒血癥。這兩個階段并不是缺一不可的，多數豬群往往僅 僅發生局部感染。若飼養管理方法不科學，則終形成全身感染，發生嚴重的非洲豬瘟臨床癥狀。通過加強管理，將感染限制在局部感染階段是實現安全生產的重要保證。
口腔內局部感染階段也是非洲豬瘟窗口期檢測的重要時機，是實現傳染病控制原則“早、快、嚴、小”的重要保證。探索非洲豬瘟唾液學檢測方法具有重要的科學指導意義和生產實踐意義。
1、唾液樣本的采集：獲得新鮮的唾液（saliva）樣本是準確診斷的前提條件之一。現行的鼻拭子（nasal swab）采樣、口腔拭子（oral swab）采樣以及肛門拭子（anal swab）采樣存在樣本陳舊、樣本容易干燥、漏檢率高等問題，已被逐漸淘汰。
2、唾液樣本中的病原半衰期：唾液中含有豐富的具備活性的酶。機體健康狀態不同，酶的含量也千差萬別，從而導致唾液中的病原體半衰期（half-life period）長短不一，對于非洲豬瘟病毒來說，長者 2～3 天，短者 1～2 小時不等。病原半衰期的存在是導致唾液學非洲豬瘟病毒漏檢率稍高的重要因素之一。
3、唾液樣本的核酸保護：采集唾液樣本之前加入適量的樣本保護劑（Sample Protesis®），可以延長病原半衰期并保持唾液活性，含有保護液的唾液樣本可以冷藏/冷凍運輸及保存。
4、唾液樣本的檢測要求：采集的唾液樣本要求清亮、透明并不得含有食物殘渣，故采樣之前的停食至關重要，原則上要求停食 12 小時以上。含有保護液的唾液中的核酸可以采用濃集法（concentration method）檢測，即離心唾液，試管底部取樣。
5、唾液樣本檢測對試劑盒的要求：由于口腔內的非洲豬瘟病毒感染往往處于初始階段，病原核酸含量相對較低（CT 值在25～30 之間，未加保護液的唾液樣本 CT 值往往在 32 以上），所以對非洲豬瘟病毒核酸檢測試劑盒的敏感性要求較高，要求盡量能夠實現單拷貝（single copy）檢測。
6) 陽性結果處置：對于唾液檢測中非洲豬瘟陽性結果（+），存 在兩種處置方案。一是嚴格剔除（“拔牙”，stamp out）陽性豬只，實現凈化生產。二是控制陽性豬群的移動，嘗試實施早期帶毒生產（局部感染而非病毒血癥），終實現凈化生產。
很多養豬科技工作者把帶毒生產簡單理解為血液中可以帶毒是非常危險的，也是禁止的。只有控制局部感染才有凈化豬群，消除病毒攜帶狀態的可能性。
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